1、朱一品（陳赫飾演）：智慧幽默的醫館學徒，在醫館館主離奇失蹤之後收到一個卷軸，他快速閱讀並記下瞭卷軸的內容，然後昏倒，卷軸毀滅。從此卷入離奇的案件。
2、楊宇軒（王傳君飾演）：高大英俊的東廠高手，白發劍眉，擅長使用長劍，奉命到醫館調查卷軸的事情。陳安安喜歡楊宇軒，但被前女友聶紫衣吃醋，一個男人兩個女人又糾纏不清。
3、柳若馨（薑妍飾演）：面貌俊俏的西廠高手，臥底醫館查案。看似漂亮但心機頗重，深得醫館朱一品跟趙佈祝的喜歡，在離奇的案件之中分辨黑白，也漸漸喜歡上朱一品。
4、陳安安（張子萱飾演）：醫館的小徒弟，活潑單純也漂亮，很喜歡館裡的朱一品，自從楊宇軒來到館中，有意無意多多接觸楊宇軒，以引起朱一品的註意，卻惹來楊宇軒前女友的仇視。
5、趙佈祝（佟磊飾演)：猥瑣醫生
6、莊田田（張藝騫飾演）:豆腐店老板
7、五百年前的大明京城，一傢小醫館裡生活著一群樂呵的年輕人。一天，醫館館主離奇失蹤，徒弟朱一品隨後收到一個卷軸，無意中打開後，天生的神速記憶讓他快速閱讀並記下瞭卷軸的內容，之後就暈厥過去，卷軸也隨之燒成灰燼。東廠西廠得知後，派麾下高手楊宇軒與柳若馨前來醫館臥底查探卷軸裡的秘密，陰差陽錯，他們和朱一品卷入一個個離奇案件。新人入局，也打破瞭醫館往日的平靜。柳若馨年輕貌美，楊宇軒高大英俊，朱一品、趙佈祝似乎都被柳姑娘所吸引，陳安安故意要跟楊宇軒親密互動，期間楊宇軒的前女友、錦衣衛副千戶聶紫衣也進來攪局，無數種可能都在小小的醫館裡悄悄發酵。朱一品帶領的醫館神探小分隊踏上冒險之旅，披荊斬棘，將一樁樁迷案及其背後的驚天秘密一一揭開。
