1、華佗何晟銘飾演、明心李依曉飾演、吳成朱曉漁飾演、胡半仙劉冠麟飾演、喜蓮劉芷汐飾演、周瑜李宗翰飾演。
2、華佗一代神醫。他樂於治病行醫，醫術高超，堅持孜孜不倦地進取，研制麻沸散、自創五禽戲、開創外科手術先河，隻為更多地減輕患者病痛、強健百姓體魄；他醫德高尚，遊醫天下，免費為窮苦百姓行醫治病，深得百姓的尊重與愛戴；身為舉世聞名的神醫，他視功名於糞土，不把為權貴看病置於為百姓看病之上，甚至因此得罪當權者。
3、明心譙郡縣縣令之女。與華佗一見鐘情，但是由於父親的阻擾和吳成的故意破壞，兩人分手，明心也被吳成下藥眼睛失明。縣令被人陷害後處死，傢道中落的明心陷入悲慘的境地。早已相識的華佗為明心醫治眼睛進而讓兩人再次互生情愫，之後明心一直陪伴在華佗身邊。
4、吳成華佗的二師兄。自小與華佗一起學習醫術，但是心機深沉為人陰狠，為瞭達目地他算計師弟、強奪師弟所愛，然後又為逐名利拋棄妻子、好權謀術、欺師滅祖，可謂無所不用其極。與華佗一直針鋒相對，想盡辦法打擊陷害華佗。
5、胡半仙華佗的大師兄，譙郡縣的醫官。雖然醫術高超，但是愛占小便宜有時還會坑蒙拐騙。他習慣遊走於市井，悠哉處事、樂觀混世的生活態度並不被身邊親朋看好。然而他對率真俏皮的喜蓮一往情深，可以毫無保留地傾盡所有。
6、喜蓮俏皮潑辣的萌妹子，“野蠻女友”式人物。一直陪伴在明心身邊。她率真的性格吸引瞭胡半仙的註意，此後對其愛得一發不可收拾。最後因卷入曹傢內鬥，喜蓮與胡半仙在刑場結婚，雙雙下酒後殉情而亡。
7、周瑜東漢末年名將，水軍大都督，孫權手下得力將領，一心對抗曹操。周瑜患有失眠病，他廣招天下名醫都沒有醫治好，而華佗卻手到病除讓他免除多日來失眠的痛苦。周瑜知道華佗想去曹營救治瘟疫，於是想華佗軟禁起來，卻被華佗巧妙逃脫。
