1、小丸子：故事主角，在學校擔任小動物值日生、3年4組第三班長(第二輯第12至549集)；喜歡無理取鬧、幼稚任性、愛和姐姐爭吵；平時愛看《Ribbon》漫畫和搞笑劇，但不愛運動、不收拾房間、愛睡懶覺、對功課不做和臨時抱佛腳。時常耍小聰明、自戀，且愛占便宜、貪錢、貪新鮮，並粗心大意，是個擁有不少小缺點的女孩。最喜愛和小玉玩遊戲，但遇到想學的事就半途而廢，另外帶給傢人不少麻煩。有時性格倔強，不聽別人勸告。偶像是山口百惠與山本琳達。
2、穗波玉：又名小玉，英文名Tammy。和小丸子一起坐在末座，兩人是形影不離的知己。文靜善良，喜歡幫助別人；天真單純，時常幻想另一個自己。傢境小康，臥室裡的大床是小丸子最羨慕的東西。當她感覺小丸子與他人的關系比自己更好時，會感到些莫名的恐慌。父親喜歡給她拍照，需要經常面對鏡頭使她很煩惱。
3、櫻小竹：小丸子的奶奶。生性節儉，內斂穩重，是個愛惜孫女們的慈祥奶奶；對從前的習俗瞭解甚多，和媽媽一樣愛儲備無用的雜物；時常和爺爺一起參加老人活動，最喜歡爺爺的老實。口頭禪是“我也活不瞭多久，最多再活三、五年”，實際上依然老當益壯。平時話不多，但會語出驚人，一語道破盲點，時常展現出意想不到的決斷及能幹。喜歡的花是君影草（鈴蘭）。年輕的時候是個大美人，被公認為是當地最美麗的女子，擁有“清水西施”之美譽。
4、櫻早紀子／櫻幸子／櫻美子：又譯幸子（原名“さきこ”，被誤譯成“さちこ”）、杏子、美子。小丸子的姐姐，與小丸子讀同一所小學的6年級。因較懂事而受傢人（櫻友藏除外）偏愛，和小丸子的性格完全相反，較冷靜成熟，但遇著郊遊旅行和喜愛的明星時，就會手舞足蹈，遇上大減價時更會與媽媽陷入瘋狂。愛編織，很討厭運動。和小丸子常常吵架，但在小丸子遇到困難或危險時也會立刻挺身而出，最初的偶像是錦野明，後來喜歡西城秀樹。
5、櫻友藏：小丸子的爺爺，頭部生得很像雞蛋，溺愛小丸子到死，對她事事認同且處處維護她，所以常被小丸子利用。他每天把電視劇情節代入當今想像，對住小丸子常常死雞撐飯蓋，愛戴著草帽，拖著烏龜散步，喜歡吃軟軟的東西，不喜歡吃柿子餅。有點老人癡呆（記性不好），但有時又會為想一件事想很久，口袋裡戴上寫著地址的卡片。經常與奶奶參加老人活動，並買些奇怪的手信回傢，還喜歡作奇怪的“友藏心之俳句”，其實毛筆字和水墨畫都還不錯。有一位不常拜訪的但常畏畏縮縮的同儕朋友中野先生，每次拜訪的舉動也令小丸子一傢人留下深刻印象。
